CytHem-LOC
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Chers membres du CytHem,
Vous trouverez ci-joint le questionnaire annoncé pour la thématique
CytHem-LOC
.
Afin de limiter le temps de réponse, merci de nous envoyer
une réponse unique par centre
. Attention, ce questionnaire concerne exclusivement
les activités de cytométrie en flux spécialisées en hématologie et réalisées en routine.
Comme vous le verrez, ce questionnaire est exhaustif et si vous le souhaitez, vous pouvez vous aider de la version papier (PDF envoyé par mail) afin de prendre connaissance des questions (une question, en particulier, concerne le nombre de LCR analysés par an et nécessite une recherche). En effet, il est indispensable de remplir l’ensemble du questionnaire pour pouvoir le « soumettre » et permettre l’enregistrement de vos réponses. Vous recevrez ensuite par mail une copie de votre questionnaire rempli.
La date limite de retour du questionnaire est fixée au 12 mars 2019.
Comme discuté lors de la première réunion du CytHem fin septembre 2018, le phénotypage des LCR nécessite une bonne maitrise des conditions pré-analytiques et une connaissance des « pièges » que l’on peut rencontrer dans les analyses de milieux biologiques où les cellules sont en conditions défavorables pour survivre et où l’infiltration tumorale peut être très faible. Des recommandations existent mais elles ne sont pas forcément applicables dans tous les sites faute de moyens humains ou de moyens financiers.
Avec ce questionnaire, nous vous proposons de faire
un état des lieux objectif des pratiques francophones des cytométristes pour le diagnostic des lymphomes oculo-cérébraux.
Les centres participant à ce questionnaire et prenant en charge des LCR seront reconnus comme centre du groupe CytHem-LOC et recevront toutes les informations relatives au groupe (newsletters, réunions réseau LOC, mode opératoires, …).
Parallèlement, un deuxième questionnaire va être adressé aux
centres cliniques du réseau national LOC.
L’analyse des deux questionnaires, biologique et clinique, sera réalisée dans leur globalité sans identification possible de chaque centre (anonymisation lors de l’analyse). Nous nous rapprocherons ensuite du
GFHC
(cytologistes) et du
GBMHM
(biologistes moléculaires) avec pour objectif d’utiliser ces données pour écrire des
recommandations adaptées à nos pratiques et à nos possibilités francophones pour la recherche de cellules lymphomateuses dans le LCR
(du pré-analytique au post-analytique).
Les résultats préliminaires seront présentés lors de la
session CytHem dans le cadre des groupes coopérateurs de la SFH
(mercredi 27 mars, 10H45-12H15, salle 221-222, Palais des Congrès, Paris)
Un grand merci à tous pour votre participation, indispensable à la réussite de ce projet et pour que les résultats qui en découlent soient les plus adaptés à nos pratiques.
Bon questionnaire !
Magali et Agathe
Suivant
Rubrique 1 : questions générales
Les champs marqués d’un astérisque rouge sont à remplissage obligatoire.
Nom de l'établissement
*
Ville
*
Adresse électronique
*
Spécialité du laboratoire (plusieurs réponses possibles)
*
Hématologie
Immunologie
Autre
Précisez
Type de laboratoire
*
Laboratoire de Centre Hospitalier Universitaire
Laboratoire de Centre Hospitalier
Laboratoire du secteur libéral
Autre
Précisez
Nom et prénom de l'interlocuteur
*
Fonction dans le laboratoire
*
Biologiste
Technicien
Ingénieur
Autre
Précisez
Réalisez-vous la recherche de cellules lymphomateuses par cytologie dans les LCR ?
*
Oui
Non
Si oui, à partir de quelle cellularité réalisez-vous l’analyse cytologique?
*
Veuillez sélectionner
Systématiquement
Si >1/µl
Si >2/µl
Si >5/µl
Si >10µl
Autre
Précisez
Réalisez-vous la recherche de cellules lymphomateuses par cytométrie en flux dans les LCR?
*
Oui
Non
Si oui, à partir de quelle cellularité réalisez-vous l’analyse par cytométrie en flux?
*
Veuillez sélectionner
Systématiquement
Si >1/µl
Si >2/µl
Si >5/µl
Si >10µl
Autre
Précisez
Seriez-vous intéressé pour mettre en place la recherche de cellules lymphomateuses par cytométrie en flux dans votre centre ?
*
Oui
Non
Je ne sais pas
Quel nombre de LCR analysez-vous par cytométrie par an ?
*
Pourriez-vous classer par ordre décroissant les prescripteurs vous adressant le plus de demandes de phénotypage dans le LCR ? (1 : le prescripteur le plus important)
1
*
Veuillez sélectionner
Neurologie
Hématologie
Médecine interne
Pédiatrie
2
*
Veuillez sélectionner
Neurologie
Hématologie
Médecine interne
Pédiatrie
3
Veuillez sélectionner
Neurologie
Hématologie
Médecine interne
Pédiatrie
4
Veuillez sélectionner
Neurologie
Hématologie
Médecine interne
Pédiatrie
Réalisez-vous l’analyse des LCR pour un centre du réseau LOC (cliniciens) ?
*
Oui
Non
Je ne sais pas
Avez-vous déjà participé à la RCP nationale téléphonique LOC?
*
Oui
Non
Je ne connais pas l’existence de ces réunions
Réalisez-vous des phénotypages sur liquide de rinçage de biopsie stéréotaxique ?
*
Oui, circuit mis en place
Épisodiquement
Non
Non, mais centre intéressé pour mettre au point la technique localement
Réalisez-vous des phénotypages sur biopsie cérébrale ?
*
Oui, circuit mis en place
Épisodiquement
Non
Réalisez-vous des dosages de cytokines IL-10 et IL-6 pour le diagnostic et le suivi des LOC (LCR et prélèvements intra-oculaires) ?
*
Oui
Non
Non, mais centre intéressé pour mettre au point la technique localement
Précédent
Suivant
Précédent
Soumettre
Rubrique 2 : Pré-analytique
Est-ce que les tubes de LCR arrivent au laboratoire numérotés dans l'ordre de prélèvement ?
*
Oui toujours
Souvent
Parfois
Rarement
Jamais
Quel volume de LCR recevez-vous en moyenne pour la recherche de cellules lymphomateuses (cytologie + cytométrie)?
*
<1mL
entre 1 et 2 mL
entre 2 et 5 ml
entre 5 et 8 ml
>8 ml
Recevez-vous un seul tube que vous partagez avec la cytologie ?
*
Oui, et je partage systématiquement
Non, je reçois 2 tubes (un pour chaque analyse)
Dans quel délai recevez-vous les tubes de LCR pour la cytométrie en flux ?
*
Le plus souvent <1h
Le plus souvent <2h
Le plus souvent <3h
Le plus souvent entre 3h et 12h
Le plus souvent > 12 h
Très différent en fonction du lieu de prélèvement (plusieurs sites cliniques)
Utilisez-vous des tubes avec un milieu de conservation/stabilisateur ?
*
Non jamais
Oui, contenant du SVF
Oui, type « Transfix »
Oui, contenant du RPMI
Oui, autres
Précisez
Si oui, où sont-ils disponibles ?
*
Dans les services cliniques
Uniquement au laboratoire
Si oui, quand utilisez-vous ce type de milieu (plusieurs réponses disponibles) ?
*
Systématiquement
Pour certains services
Pour certains jours ou horaires (nuit, week-end)
Jamais
Remarques sur votre expérience (type de tube, intérêt, stabilité de l’expression des antigènes…) :
Rendez-vous une non-conformité en fonction du délai de traitement de l’échantillon ou en l’absence d’heure de prélèvement ?
*
Oui
Non
Si le délai d’analyse vous semble dépassé, réalisez-vous quand même le phénotypage ?
*
Oui
Non
Cela dépend du délai
Quelles procédures particulières utilisez-vous avec les services cliniques pour faire arriver les tubes plus rapidement au laboratoire (plusieurs réponses possibles)?
*
Aucune
Prise de rendez-vous par téléphone, mail,…
Distribution du LCR sans délai par un agent du service clinique
Recherche du LCR sans délai par un agent du service biologique
Quelles sont les horaires d’ouverture du secteur de cytométrie en semaine ?
*
Le secteur de cytométrie est –il ouvert le week-end ?
*
Oui
Non
Si le LCR arrive au laboratoire en dehors des heures d’ouverture du secteur de cytométrie en flux, que faites-vous ?
*
Phénotypage réalisé ultérieurement avec conservation (transfix, milieu RPMI, SVF,…)
Phénotypage réalisé ultérieurement sans conservation particulière
Phénotypage annulé et cytologie réalisée
Phénotypage et cytologie annulée
Cela dépend du délai
Avez-vous préparé un système de demande avec des renseignements cliniques à cocher ?
*
Oui
Non, renseignements cliniques libres
Quels sont les renseignements cliniques qui vous semblent pertinents (plusieurs réponses possibles)?
*
Diagnostic
Suivi
Type de lymphome (cérébral primitif, cérébral secondaire, oculaire, lymphome systémique,…)
Corticothérapie
Autres traitements
Symptômes cliniques
Résultats d’imagerie
Antécédents médicaux
Autres
Précisez
Précédent
Suivant
Rubrique 3 : Analytique
Pour la recherche de cellules lymphomateuses dans le LCR, réalisez-vous le marquage ?
*
En une seule fois : totalité du LCR utilisé
En plusieurs fois, précisez
Précisez
Avez-vous une démarche particulière pour la recherche de cellules lymphomateuses dans le LCR ?
*
Non, j’utilise mon tube de screening lymphocyte
Oui, j’utilise un tube dédié à la recherche de lymphome cérébral
Quels marqueurs étudiez-vous (plusieurs réponses possibles)?
*
CD45
CD19
CD20
CD10
CD38
Lambda
CD3
CD4
CD5
CD8
CD56
CD16
CD14
CD34
CD138
TCR gammadelta
Glycophorine
Kappa
Autre(s)
Précisez
Utilisez-vous des billes de comptage pour déterminer la valeur absolue des leucocytes ?
*
Oui
Non
En cas de volume suffisant et de détection de cellules lymphomateuses, réalisez-vous une autre combinaison ?
*
Non
Oui, laquelle
Laquelle
*
Comment évaluez-vous l’éventuelle hémodilution du LCR?
*
Décompte GR et GB en cellule de Mallassez
Décompte des GR par cytométrie
Dosage de l’hémoglobine
Autre
Précisez
Si vous réalisez les dosages de cytokines IL-10 et IL-6, quelle technique utilisez-vous ?
*
Technique CBA par cytométrie en flux
ELISA
Luminex
Non concerné
Autre
Précisez
Précédent
Suivant
Rubrique 4 : Interprétation des résultats par le laboratoire
En combien de temps en moyenne rendez-vous le résultat de la recherche de cellules lymphomateuses pour une suspicion de LOC (LCR, liquide vitré ou liquide de rinçage de biopsie cérébrale) ?
*
<4H
Dans la journée
<24H
<48H
Aléatoire en fonction de l’organisation du service
Qui est habilité à transmettre le résultat de la recherche de cellules lymphomateuses (plusieurs réponses possibles) ?
*
Les biologistes
Les internes
Les techniciens
Quel est le nombre d’événements minimal que vous utilisez pour affirmer la présence de cellules lymphomateuses ?
*
5
10
20
50
Autre
Précisez
Sur quels critères, les cellules sont-elles définies comme lymphomateuses (plusieurs réponses possibles) ?
*
Restriction isotypique Kappa ou lambda
Expression d’un marqueur tumoral (CD10, CD5, autre)
Taille et structure des cellules
Autre
Précisez
Tenez-vous compte de l’hémodilution dans l’interprétation du phénotypage du LCR ?
*
Oui
Non
En cas de présence de cellules lymphomateuses détectées dans le LCR, demandez-vous un phénotypage sanguin ?
*
Oui, systématiquement
Oui, uniquement si suspicion d’hémodilution
Non
En cas de présence de cellules lymphomateuses détectées dans un liquide de rinçage de biopsie cérébrale, demandez-vous un phénotypage sanguin ?
*
Oui, systématiquement
Oui, uniquement si détection de cellules lymphomateuses, quel que soit le contexte
Oui, uniquement si détection de cellules lymphomateuses et si suspicion de localisation secondaire de lymphome B systémique
Non
Non concerné, je ne fais pas cette analyse
Précédent
Suivant
Rubrique 5 : Post-analytique
Conservez-vous du LCR congelé ?
*
Oui systématiquement
Oui quand volume suffisant
Oui, en fonction des analyses demandées
Jamais
En cas de suspicion de LOC, conservez-vous du LCR pour réaliser le dosage des cytokines IL-10 et IL-6 ?
*
Systématiquement
A la demande du clinicien
Si des cellules lymphomateuses sont détectées
Si des cellules lymphomateuses ne sont pas détectées
Jamais
En cas de suspicion de LOC, conservez-vous du LCR pour réaliser des analyses biologie moléculaire ?
*
Oui systématiquement
Oui si demandé par le clinicien
Non, aucune analyse de biologie moléculaire n’est effectuée
Quelles analyses de biologie moléculaire sont réalisées sur les LCR que vous analysez (plusieurs réponses possibles)?
*
Aucune
Réarrangement des chaînes lourdes des immunoglobulines
Réarrangement du TCR
Recherche de la mutation MYD88L265P
Recherche de mutation sur CXCR4
Autre
Précisez
Conservez-vous le surnageant du LCR pour l’analyse de l’ADN circulant?
*
Oui
Non
Sur les liquides de rinçage de biopsies cérébrales, conservez-vous du matériel (plusieurs réponses possibles) ?
*
Non concerné, je ne fais pas cette analyse
Des cellules sont congelées en DMSO
Conservation en ADN (culot sec)
Conservation en ARN (RLT, autre)
Aucun matériel n’est conservé
Quelles analyses de biologie moléculaire sont réalisées sur les liquides de rinçage de biospies cérébrales que vous analysez (plusieurs réponses possibles)?
*
Aucune
Réarrangement des chaînes lourdes des immunoglobulines
Réarrangement du TCR
Recherche de la mutation MYD88L265P
Recherche de la mutation sur CXCR4
Panel lymphoïde NGS
Autre
Précisez
Précédent
Suivant
Rubrique 6 : Participation groupe CytHem-Loc
Pensez-vous que des recommandations pour standardiser le diagnostic des LOC soient nécessaires ?
*
Oui
Non
Souhaitez-vous participer à un workshop d’harmonisation de la recherche de cellules lymphomateuses dans le LCR ?
*
Oui
Non
Souhaitez-vous participer à une comparaison interlaboratoire en cytométrie en flux dédié au LOC (plusieurs réponses possibles) ?
Non
Oui : cas virtuels
Oui : LCR stabilisé
Souhaitez-vous intégrer le groupe CytHem-LOC en tant qu’expert ?
*
Oui
Non
Précédent
Soumettre
Ce champ devrait être laissé vide